2. Munkacsoport vezetőjének neve, tudományos fokozata, beosztása:
Prof. Dr. Kiss Csongor, M.D., Ph.D, Dsc., egyetemi tanár
3. Munkacsoport összetételének bemutatása:
- Dr. Gaál Zsuzsa, M.D., Ph.D, egyetemi tanársegéd
- Dr. Petrás Miklós, M.D., szakorvos
Munkacsoportunk kutatási célkitűzései között kiemelt helyen szerepel az akut leukémiák mikro-RNS expressziós mintázatának vizsgálata, mely eredmények a differenciáldiagnosztika,
továbbá a prognózis és a kemorezisztencia előrejelzés területén is felhasználhatóak lehetnek. A hematológiai laboratóriumban RNS-munkához alkalmas részleg kialakítását kezdtük meg,
melynek során RNS-izolálásra alkalmas vegyi fülke, illetve qPCR gép beszerzése történt meg. Fentiekkel párhuzamosan a laboratórium -80C-os fagyasztó egységében gyermek ALL-es betegektől
diagnózis idején nyert csontvelői és szérum minták gyűjtését kezdtük meg. A mintavételt további centrumokra terjesztjük ki, továbbá munkacsoportunkat PhD-hallgatók bevonásával bővítjük.
A sejtek felvétele további kísérletekhez, fenntartása, passzálása – a szükséges tápoldatok elkészítése, tárolása streril körülmények között.
Sejtek felülfertőződésének ellenőrzése: steril körülmények szigorú kontrollja, antibiotikum ellenőrzése, aliquot fagyasztás előtt Mycoplasma teszt elvégzése.
A fényre, oxigénre kifejezetten érzékeny ATRA (all-trans reténsav) feloldása, törzsoldatok elkészítése nitrogén atmoszféra alatt kis volumenű aliquotokban tárolva,
72 óra inkubáció, 37C, 5% CO2, steril körülmények között.
A kombinációs kezelések mérése multimode microplate reader segítségével.
Dózis-hatás görbék felvétele az ismert fiziológiás cink koncentráción túl a sejtvonalankénti cytotoxikus dózisok meghatározásának céljából.
A proliferációs vizsgálatok alapján meghatározott leghatékonyabb kombinációkban az apoptózis mértékének meghatározását Annexin V / Hoechst33342 – propidium jodid jelöléssel,
subdiploid populáció meghatározásával, illetve citospin mintákon konfokális mikroszkópiával.
Leukémiás betegektől perifériás vérminták gyűjtése, a sejtek szeparálása és gyorsfagyasztása a tervezett klinikai mintavizsgálatokhoz.
A sejtvonalak (NB4, THP-1, HL-60) differenciációs marker mintázatának vizsgálata a promyelocytás és monocytás leukémiának megfelelő sejtfelszíni CD markerek jelölésével
fluoreszcens-festékkel jelzett antitestek segítségével áramlási citometriás vizsgálatokhoz.
A kísérletek eredményei alapján RNS izolálása és mRNS génexpressziós vizsgálatok előkészítése, klaszter analízis elvégzése – ezek alapján molekuláris interakciók vizsgálata