Kutatás

1. A szervezeti egység megnevezése:

DE ÁOK Gyermekgyógyászati Intézet

2. Munkacsoport vezetőjének neve, tudományos fokozata, beosztása:

Prof. Dr. Kiss Csongor,

M.D., Ph.D, Dsc., egyetemi tanár

Publikációk

3. Munkacsoport összetételének bemutatása:

Dr. Szegedi István, med.habil. egyetemi docens, Ph.D

Dr. Gaál Zsuzsa, Ph.D, egyetemi tanársegéd

Dr. Petrás Miklós, Ph.D, egyetemi tanársegéd

Dr. Macsi Lilla, szakorvos

Göncziné Kiss Judit, biológus

Munkacsoportunk kutatási célkitűzései között kiemelt helyen szerepel az akut leukémiák mikro-RNS expressziós mintázatának vizsgálata, mely eredmények a differenciáldiagnosztika, továbbá a prognózis és a kemorezisztencia előrejelzés területén is felhasználhatóak lehetnek. A hematológiai laboratóriumban RNS-munkához alkalmas részleg kialakítását kezdtük meg, melynek során RNS-izolálásra alkalmas vegyi fülke, illetve qPCR gép beszerzése történt meg. Fentiekkel párhuzamosan a laboratórium -80C-os fagyasztó egységében gyermek ALL-es betegektől diagnózis idején nyert csontvelői és szérum minták gyűjtését kezdtük meg. A mintavételt további centrumokra terjesztjük ki, továbbá munkacsoportunkat PhD-hallgatók bevonásával bővítjük.

Sejtek felülfertőződésének ellenőrzése: steril körülmények szigorú kontrollja, antibiotikum ellenőrzése, aliquot fagyasztás előtt Mycoplasma teszt elvégzése.

A fényre, oxigénre kifejezetten érzékeny ATRA (all-trans reténsav) feloldása, törzsoldatok elkészítése nitrogén atmoszféra alatt kis volumenű aliquotokban tárolva, sterilen zárva -80C-on kelvinátorban. Kombinációs kezelések (ATRA, ATO, cink) hatékonyságának meghatározásához proliferációs tesztek (EZ4U, Biomedica) előkészítése, elvégzése: 72 óra inkubáció, 37C, 5% CO2, steril körülmények között.

A kombinációs kezelések mérése multimode microplate reader segítségével.

Dózis-hatás görbék felvétele az ismert fiziológiás cink koncentráción túl a sejtvonalankénti cytotoxikus dózisok meghatározásának céljából.

A proliferációs vizsgálatok alapján meghatározott leghatékonyabb kombinációkban az apoptózis mértékének meghatározását Annexin V / Hoechst33342 – propidium jodid jelöléssel, subdiploid populáció meghatározásával, illetve citospin mintákon konfokális mikroszkópiával.

Leukémiás betegektől perifériás vérminták gyűjtése, a sejtek szeparálása és gyorsfagyasztása a tervezett klinikai mintavizsgálatokhoz.

A sejtvonalak (NB4, THP-1, HL-60) differenciációs marker mintázatának vizsgálata a promyelocytás és monocytás leukémiának megfelelő sejtfelszíni CD markerek jelölésével fluoreszcens-festékkel jelzett antitestek segítségével áramlási citometriás vizsgálatokhoz.

Továbbiakban FLT3-receptor expressziójának, mutációs státuszának meghatározása FLT3-ITD mutáns sejtvonalakon (MOLM-13, MV4;11).

A kísérletek eredményei alapján RNS izolálása és mRNS génexpressziós vizsgálatok előkészítése, klaszter analízis elvégzése – ezek alapján molekuláris interakciók vizsgálata.

Gyermekkori daganatos betegség miatt kezelt, tartós remisszióban lévő betegeink késői mellékhatásainak és életminőségének felmérése klinikai diagnosztikai vizsgáló módszerek és kérdőívek segítségével.