1. A szervezeti egység megnevezése:

    DE ÁOK Gyermekgyógyászati Intézet

2. Munkacsoport vezetőjének neve, tudományos fokozata, beosztása:

   Prof. Dr. Kiss Csongor, M.D., Ph.D, Dsc., egyetemi tanár

3. Munkacsoport összetételének bemutatása:

  - Dr. Gaál Zsuzsa, M.D., Ph.D, egyetemi tanársegéd

  - Dr. Petrás Miklós, M.D., szakorvos

Munkacsoportunk kutatási célkitűzései között kiemelt helyen szerepel az akut leukémiák mikro-RNS expressziós mintázatának vizsgálata, mely eredmények a differenciáldiagnosztika,

továbbá a prognózis és a kemorezisztencia előrejelzés területén is felhasználhatóak lehetnek. A hematológiai laboratóriumban RNS-munkához alkalmas részleg kialakítását kezdtük meg,

melynek során RNS-izolálásra alkalmas vegyi fülke, illetve qPCR gép beszerzése történt meg. Fentiekkel párhuzamosan a laboratórium -80C-os fagyasztó egységében gyermek ALL-es betegektől

diagnózis idején nyert csontvelői és szérum minták gyűjtését kezdtük meg. A mintavételt további centrumokra terjesztjük ki, továbbá munkacsoportunkat PhD-hallgatók bevonásával bővítjük.

Promyelocytás (NB4, HL-60) és monocytás myeloid leukémia (THP-1) sejtvonalak fagyasztása, tárolása folyékony nitrogén tartályban

A sejtek felvétele további kísérletekhez, fenntartása, passzálása – a szükséges tápoldatok elkészítése, tárolása streril körülmények között.

Sejtek felülfertőződésének ellenőrzése: steril körülmények szigorú kontrollja, antibiotikum ellenőrzése, aliquot fagyasztás előtt Mycoplasma teszt elvégzése.

A fényre, oxigénre kifejezetten érzékeny ATRA (all-trans reténsav) feloldása, törzsoldatok elkészítése nitrogén atmoszféra alatt kis volumenű aliquotokban tárolva,

sterilen zárva -80C-on kelvinátorban. Kombinációs kezelések (ATRA, ATO, cink) hatékonyságának meghatározásához proliferációs tesztek (EZ4U, Biomedica) előkészítése, elvégzése:

72 óra inkubáció, 37C, 5% CO2, steril körülmények között.

A kombinációs kezelések mérése multimode microplate reader segítségével.

Dózis-hatás görbék felvétele az ismert fiziológiás cink koncentráción túl a sejtvonalankénti cytotoxikus dózisok meghatározásának céljából.

A proliferációs vizsgálatok alapján meghatározott leghatékonyabb kombinációkban az apoptózis mértékének meghatározását Annexin V / Hoechst33342 – propidium jodid jelöléssel,

subdiploid populáció meghatározásával, illetve citospin mintákon konfokális mikroszkópiával.

Leukémiás betegektől perifériás vérminták gyűjtése, a sejtek szeparálása és gyorsfagyasztása a tervezett klinikai mintavizsgálatokhoz.

A sejtvonalak (NB4, THP-1, HL-60) differenciációs marker mintázatának vizsgálata a promyelocytás és monocytás leukémiának megfelelő sejtfelszíni CD markerek jelölésével

fluoreszcens-festékkel jelzett antitestek segítségével áramlási citometriás vizsgálatokhoz.

Továbbiakban FLT3-receptor expressziójának, mutációs státuszának meghatározása FLT3-ITD mutáns sejtvonalakon (MOLM-13, MV4;11).

A kísérletek eredményei alapján RNS izolálása és mRNS génexpressziós vizsgálatok előkészítése, klaszter analízis elvégzése – ezek alapján molekuláris interakciók vizsgálata